Клинико-диагностическое значение исследования активности 5´-нуклеотидазы, ксантиноксидазы, ксантиндегидрогеназы в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных системной склеродермией 14. 00. 39 ревматология



Скачать 476.5 Kb.
страница1/3
Дата05.05.2016
Размер476.5 Kb.
  1   2   3


На правах рукописи

КАРПОВА Оксана Викторовна


КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
ИССЛЕДОВАНИЯ АКТИВНОСТИ 5´-НУКЛЕОТИДАЗЫ, КСАНТИНОКСИДАЗЫ, КСАНТИНДЕГИДРОГЕНАЗЫ

В ЛИЗАТАХ ЛИМФОЦИТОВ, ЭРИТРОЦИТОВ

И ПЛАЗМЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ
СИСТЕМНОЙ СКЛЕРОДЕРМИЕЙ
14.00.39 – ревматология


Автореферат


диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Волгоград – 2007


Работа выполнена в ГУ «НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН» и ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ



Научный руководитель:


доктор медицинских наук, профессор

МАРТЕМЬЯНОВ Владислав Федорович








Официальные

оппоненты:



доктор медицинских наук, профессор

ЧИЖОВ Петр Александрович





доктор медицинских наук

ЛЕМПЕРТ Борис Аркадьевич


Ведущая организация:

Оренбургская государственная

медицинская академия



Защита состоится  2007 г. в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 208.008.02 в ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1).


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1).

Автореферат разослан  ____  ______________ 2007 г.



Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор А.Р. Бабаева


ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Несмотря на то, что системная склеродермия (ССД) является относительно редким заболеванием (первичная заболеваемость колеблется от 3,7 до 19,0 на 1 млн. населения в год), она характеризуется тяжелым инвалидизирующим и прогрессирующим течением. Поражает преимущественно женщин (в 3-4 раза чаще, чем мужчин) в наиболее трудоспособном, продуктивном возрасте (30-45 лет), значительно сокращает продолжительность жизни, требует высоких материальных затрат на лечение и поэтому борьба с этим заболеванием является довольно значимой актуальной медико-социальной проблемой. Сложность борьбы усугубляется отсутствием данных об этиологии заболевания, неясностью многих патогенетических звеньев ССД, многообразием терапевтических подходов и их недостаточной эффективностью, отсутствием методов профилактики.

Течение ССД чаще всего хроническое, с трудно определяемыми клиническими ремиссиями, а в арсенале врача-ревматолога довольно мало диагностических средств и методов, позволяющих с надежностью определять период клинической ремиссии и минимальные субклинические проявления активности патологического процесса. Поэтому поиск новых клинических и параклинических методов, способных своевременно распознать начало активации процесса даже у больных с заведомо известным диагнозом ССД, является достаточно актуальной задачей, так как своевременно назначенная адекватная терапия является гарантом быстрого купирования патологического процесса и достижения клинической ремиссии.

Учитывая, что ССД сопровождается выраженными метаболическими и иммунологическими расстройствами (Н. Гусева 1975; А. Матулис и др 1982; А. Кульберг, 1986; В. Насонова, 1986; Д. Лебедев, 1988; И. Зборовская, 1995), перспективным направлением в решении диагностических и патогенетических проблем, как нам представляется, является изучение пуринового метаболизма (ПМ) при ССД с помощью определения активности энзимов, катализирующих реакции метаболизма пуринов.

Пуриновые метаболиты принимают участие в синтезе белка, нуклеиновых кислот, участвуют в созревании, пролиферации и дифференциации иммунокомпетентных клеток, регуляции тонуса кровеносных сосудов, а также многих жизненно важных функций организма (Н. Дмитренко, 1984, 1990; В. Уманский и др, 1989; A. Chalmers et al, 1990), а энзимы, регулирующие обменные реакции пуринов, являются весьма чувствительными индикаторами изменений метаболизма и иммунного статуса в организме.

Имеется уже достаточно много данных о нарушениях ПМ и выраженных изменениях активности энзимов этого цикла при таких ревматических заболеваниях как остеоартроз (ОА), ревматоидный артрит (РА), системная красная волчанка (СКВ) в сыворотке крови.

Учитывая это, нами были проведены исследования активности некоторых энзимов ПМ: ксантиноксидазы (КО), ксантиндегидрогеназы (КДГ) и 5´-нуклеотидазы (5´-НТ) в эритроцитах, лимфоцитах и плазме крови больных ССД.



Цель исследования. Повышение качества диагностики активности патологического процесса при системной склеродермии, объективизации контроля эффективности проводимой терапии с использованием показателей активности энзимов ПМ: КО, КДГ и 5´-НТ.

Задачи исследования.



  1. Отработать методы выделения лимфоцитов и эритроцитов из венозной крови и методы определения активности КО, КДГ, 5´-НТ в плазме крови, лизатах лимфоцитов и эритроцитов здоровых людей, установить референтные величины (условную норму) активности этих энзимов и изучить зависимость энзимных показателей от пола и возраста.

  2. Изучить активность КО, КДГ и 5´-НТ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ССД в процессе стационарного лечения в зависимости от степени активности патологического процесса, характера течения заболевания и стадии болезни.

  3. Выявить энзимологические особенности крови, способствующие дифференциации различных вариантов течения и стадии болезни.

  4. Определить наиболее оптимальный набор энзимных показателей, способствующий выявлению минимальной активности патологического процесса при ССД.

  5. Изучить корреляционные связи между активностями КО, КДГ и 5´-НТ в плазме, эритроцитах и лимфоцитах у здоровых и больных ССД.

  6. Оценить возможность использования изученных энзимных показателей в качестве дополнительных объективных критериев эффективности проводимой терапии больных ССД.

Научная новизна. Впервые у больных ССД в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови было проведено комплексное исследование активности трех энзимов ПМ: ксантиноксидазы, ксантиндегидрогеназы и 5´-нуклеотидазы в процессе стационарного лечения и показано, что изученные энзимные показатели в комплексе с клиническими данными способствуют в уточнении степени активности патологического процесса, характера течения заболевания, стадии болезни и объективизации оценки эффективности проводимой терапии больных ССД. Показано, что изменения активности ферментов обусловлены клиническими особенностями заболевания и его тяжестью.

Выявлены существенные нарушения ПМ в клетках крови и плазме, способные оказать негативное влияние на иммунокомпетентные клетки и регуляцию иммунных процессов при ССД.



Практическая значимость. Исследования активности КО, КДГ и 5´-НТ в комплексе с клиническими данными могут быть использованы в клинической практике для выявления и уточнения степени активности патологического процесса при ССД, характера течения, стадии болезни, что способствует индивидуализированной, адекватной терапии. В процессе лечения контроль динамики энзимных показателей способствует объективизации оценки эффективности проводимой терапии больных ССД, прогнозированию ее длительности.

Основные положения, выносимые на защиту.

Показатели активности КО, КДГ и 5´-НТ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ССД могут быть успешно использованы в качестве дополнительных параклинических данных для ранней диагностики активности патологического процесса, уточнения степени активности, характера течения, стадии болезни и объективизации оценки эффективности проводимой терапии.

Внедрение в практику.

Методы определения активности КО, КДГ и 5´-НТ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови для выявления и уточнения степени активности патологического процесса при ССД внедрены в практику работы муниципального учреждения здравоохранения «Городская клиническая больница № 25» г. Волгограда.

С результатами энзимных исследований, возможностями энзимной диагностики ССД, их перспективой и значимостью систематически знакомятся студенты Волгоградского государственного медицинского университета, аспиранты, клинические ординаторы и практические врачи на научно-практических и клинических конференциях.

Публикации и апробация работы.

Основные положения диссертации опубликованы в 10 печатных работах. Материалы диссертации ежегодно докладывались на научно-практических конференциях Волгоградского государственного медицинского университета (2004-2006 гг.).

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 157 страницах компьютерного текста и состоит из введения, части I — обзора литературы, представленного одной главой, содержащей основные сведения о медико-биологической роли пуринового метаболизма, некоторых физико-химических свойствах изучаемых ферментов и их использовании в клинической практике; части II — собственных исследований, состоящей из 4 глав, включающих клиническую характеристику больных, методы исследований, результаты исследований, обсуждение полученных результатов, выводы и практические рекомендации.

Диссертация иллюстрирована 35 таблицами, 9 рисунками, 2 выписками из историй болезни. Библиографический указатель содержит 343 источников, из которых 84 отечественных и 259 зарубежных.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Под наблюдением в условиях стационара находились 50 больных ССД, из которых 46 (92%) женщин и 4 (8%) мужчины. Средний возраст больных – 42,1 ± 1,37 (σ = 9,7) лет, средняя продолжительность болезни – 6,96 ± 0,41 (σ = 2,9) лет. 24% больных были в возрасте 31–40 лет, 64 % – в возрасте старше 40 лет. Длительность болезни до 5 лет отмечалась у 16 (32%) больных, 6-10 лет – у 28 (56%) и 11-15 лет – у 6 (12%) больных.

Согласно диагностическим критериям и отечественной классификации ССД (Н. Гусева, 1975; В. Насонова и др., 1989) I степень активности патологического процесса установлена у 19 (38%) больных, II – у 26 (52%) и III степень – у 5 (10%), хроническое течение заболевания – у 25 (50%), подострое – у 21 (42%) и острое течение – у 4 (8%) больных. I стадия болезни определялась у 18 (36%), II стадия – у 32 (64%) больных.

Хроническое течение преобладало (84,2%) при I степени активности процесса, подострое (65,4%) – при II степени и острое течение (80%) – при III степени. При длительности болезни до 5 лет чаще (93,8%) определялась I стадия болезни, 6-10 лет – II стадия (89,3%). Чем выше была активность патологического процесса, тем моложе был возраст больных.

Контрольную группу составили 35 практически здоровых людей (доноры станции переливания крови).

Выделение клеток (лимфоциты, эритроциты) из венозной крови проводилось по методике, предложенной Böyum (1980). Для разделения клеток крови использовался лимфосеп (Lympho separation mudium) фирмы "JCN Biomedical" с плотностью раствора 1,077-


1,079 г/мл. Лизаты клеток готовились путем замораживания–оттаивания. Активность энзимов в лизатах клеток рассчитывалась для лимфоцитов на 1 мл, содержащий 1×107 клеток, для эритроцитов на 1 мл, содержащий 1×109 клеток. В исследовании использовалась предварительно силиконированная стеклянная посуда. Определение активности КО проводилось по модифицированной методике Калькара (Е. Дячина, 1973), активности КДГ – с использованием оптического теста Варбурга (Z. Devenui et al., 1987), активности 5'-НТ – по методике R. Wood et al. (1981).

Активность всех энзимов во всех трех биологических средах исследований выражали в нмоль/мин/мл. Энзимные исследования у больных проводились трижды: при поступлении в стационар, через 10-12 дней лечения и перед выпиской из стационара, в стадии начинающейся клинической ремиссии. У всех больных также определялись: общий анализ крови и мочи, общий белок и белковые фракции сыворотки крови, фибриноген, СРБ, иммуноглобулины, ЦИК, РФ, АНФ, антитела к н-ДНК. Использовались также инструментальные методы исследований (ЭКГ, УЗИ, рентгеноскопия-графия и др.). В лечении использовалась гормонально-медикаментозная терапия, НПВП, сосудорасширяющие препараты (трентал, кавинтон), антиаггреганты, метотрексат, лидаза, Д-пеницилламин, ЛФК, массаж.

Статистическая обработка данных проводилась с использованием программного пакета STATISTICA 6.0 для Windows с вычислением средней арифметической (М), ошибки средней (m), стандартного отклонения средней (σ), достоверности различий с использованием
t-критерия Стьюдента, коэффициента корреляции (r) по Пирсону и Спирмену. Для всех видов анализа различия считали достоверными при р < 0,05.


РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Существенных различий показателей активности КО, КДГ и


5'-НТ у здоровых во всех трех биологических средах исследований в зависимости от пола и возраста не выявлено, что позволило в дальнейшем исследовании в больных эти факторы не учитывать.

У больных ССД (всей группы) при поступлении на лечение выявлено в плазме (табл. 1) повышение активности всех энзимов: КО


(р < 0,001), КДГ (р < 0,001) и 5'-НТ (р < 0,01), в лизатах эритроцитов (табл. 2) повышение активности КО, 5'-НТ (все р < 0,001) и снижение активности КДГ (р < 0,001), в лизатах лимфоцитов (табл. 3) снижение активности всех энзимов (р < 0,001).

Таблица 1

Активность энзимов в плазме крови здоровых и

больных ССД в процессе лечения


Контингент

Кол-во больных

Стат. показатели

При поступлении

Перед выпиской

КО

КДГ

5´-НТ

КО

КДГ

5´-НТ

Здоровые

35

M

m


3,44

0,10


5,23

0,12


8,76

0,17








ССД, вся группа

50

M

m


4,03

0,09


7,30

0,07


9,35

0,08


3,55

0,05


5,74

0,09


8,80

0,12


ССД, I степень активности

19

M

m


3,52

0,12


6,44

0,09


9,48

0,21


3,45

0,07


5,38

0,11


8,82

0,14


ССД, II степень активности

26

M

m


4,02

0,09


7,38

0,08


10,6

0,19


3,52

0,06


6,03

0,08


9,11

0,09


ССД, III степень активности

5

M

M


4,48

0,13


8,03

0,14


7,92

0,23


3,68

0,10


5,81

0,11


8,43

0,16


CCД, хроническое течение

25

M

m


3,49

0,08


6,27

0,11


9,37

0,16


3,42

0,06


5,42

0,07


8,91

0,12


CCД, подострое течение

21

M

m


4,23

0,09


7,43

0,10


10,42

0,17


3,58

0,06


5,94

0,07


9,04

0,12


CCД, острое течение

4

M

m


4,58

0,11


8,15

0,12


8,23

0,22


4,02

0,08


6,33

0,09


8,42

0,12


ССД, I стадия

18

M

m


3,88

0,11


7,18

0,10


9,18

0,19








ССД, II стадия

32

M

m


4,28

0,10


7,42

0,09


9,51

0,16







Через 10-12 дней лечения в плазме отмечалось значительное снижение активности КДГ (р < 0,001) и тенденция к снижению активности КО и 5'-НТ (р > 0,05), в эритроцитах – повышение активности КДГ (р < 0,001) и тенденция к снижению активности 5'-НТ и КО (р > 0,05), в лимфоцитах – повышение активности всех энзимов: КО


(р < 0,01), КДГ (р < 0,001) и 5'-НТ (р < 0,001).
Таблица 2

Активность энзимов в лизатах эритроцитов

здоровых и больных ССД в процессе лечения


Контингент

Кол-во больных

Стат. показатели

При поступлении

Перед выпиской

КО

КДГ

5´-НТ

КО

КДГ

5´-НТ

Здоровые

35

M

m


22,3

0,32


48,8

0,54


40,1

0,96








ССД, вся группа

50

M

m


26,7

0,69


11,9

0,42


48,7

1,08


23,5

0,17


30,0

0,66


41,5

0,33


ССД, I степень активности

19

M

m


31,7

0,62


15,0

0,37


52,7

0,79


24,5

0,29


34,9

0,63


42,7

0,33


ССД, II степень активности

26

M

m


24,7

0,43


10,6

0,30


45,4

0,69


22,8

0,06


27,6

0,48


40,3

0,24


ССД, III степень активности

5

M

M


18,3

0,49


7,02

0,13


38,6

0,89


23,2

0,65


23,7

0,77


39,7

0,27


CCД, хроническое течение

25

M

m


30,3

0,71


14,2

0,40


51,9

0,79


24,2

0,25


33,2

0,77


42,5

0,27


CCД, подострое течение

21

M

m


24,2

0,61


10,2

0,40


44,1

0,49


22,8

0,06


27,4

0,67


39,7

0,17


CCД, острое течение

4

M

m


18,0

0,50


6,95

0,14


38,1

0,89


23,4

0,82


23,9

0,94


40,0

0,17


CCД, I стадия

18

M

m


29,8

1,24


13,8

0,72


50,6

1,46








CCД, II стадия

32

M

m


25,0

0,71


10,8

0,44


45,8

0,81







В процессе дальнейшего лечения клиническое состояние больных существенно улучшилось и наблюдалась дальнейшая положительная динамика энзимных показателей. Перед выпиской из стационара в плазме крови (табл. 1), по сравнению с начальным этапом, значительно снизилась активность всех энзимов (р < 0,001), в эритроцитах (табл. 2) – снизилась активность 5'-НТ, КО (р < 0,001) и повысилась ранее сниженная активность КДГ (р < 0,001), в лимфоцитах (табл. 3) – повысилась ранее сниженная активность всех энзимов


(р < 0,001).
  1   2   3


База данных защищена авторским правом ©bezogr.ru 2016
обратиться к администрации

    Главная страница